小麦叶疫病检疫研究

介绍了１９９２￣１９９５年间小麦叶疫病检疫研究的主要结果。研究证实我国局部地区已有叶疫病发生,分离得到了１１个小麦链格孢菌株,并研究了其生物学特性,确定了小麦链格孢的鉴定条件和鉴别标准,发现分生孢子链长度和分枝状况是区分类似种类的主要特征。提出了病株诊断方法和种子带菌的快速检验方法,后者包括吸水纸培养检验法和ＧＬＵＺＡ鉴别性培养基培养检验法,根据研究结果和国外发病动态,提出了有关检疫对策的建议。     

贡柑黑腐病病原菌的分子鉴定

贡柑黑腐病是近年来在贡柑上发生的一种新型病害，该病害可导致嫩梢快速枯死，大量嫩叶脱落，严重影响树势和产量。本研究从病区采集发病枝叶，对贡柑黑腐病病原菌进行分离、纯化，并采用rDNA-ITS序列分析技术对其进行分子鉴定。结果表明，贡柑黑腐病病原菌为链格孢属（Alternaria Nees）真菌，rDNA-ITS序列与GenBank中芸薹链格孢菌(Alternaria brassicae (Berk.) Sacc.)和柑桔链格孢菌(Alternaria citri Ellis & Everhart)的ITS序列的同源性为99%。结合形态学特征，推断该病原菌为柑桔链格孢菌。     

The Role of Phenolics and Peroxidase in Resistance to Alternaria triticina in Bread Wheat (Triticum aestivum L.)

Total phenolic content in eight diverse wheat lines showed that PF-70354 YACO'S' had the highest (802.90 ± 1.35 μg g⁻¹ fresh weight) and Agra Local possessed the lowest amount (684.72 ± 5.28 μg g⁻¹ fresh weight). However, for further experiments two lines namely, ACC-8226 and MP-845, with contrasting disease scores under field trials were assessed. Pre-infectional levels of total phenolics and peroxidase activity were higher in ACC-8226 than in MP-845. Furthermore, the amount of phenolics and peroxidase activity in each case increased after inoculation. The post-infectional levels of phenolics and peroxidase were again higher in ACC-8226 than in MP-845. The peroxidase activity decreased with age in both the varieties, with very little peroxidase activity after 35th day. However, the amount of phenolics started to decrease with the progress of disease and age in MP-845, whereas in ACC-8226 an elevated level of it was maintained. Our findings not only support that ACC-8226 is the resistant and MP-845 is the susceptible variety but also provide important biochemical parameters for plant breeders to authentically identify potential breeding material and plan effective breeding strategies using these tools.     

Evaluation of tangerine hybrid resistance to Alternaria alternata

The Alternaria Brown Spot, caused by Alternaria alternata, is a major fungal disease in some kinds of tangerines, tangor, mandarins and pomelos. In Brazil as well as worldwide, A. alternata can cause necrosis in fruits, branches and leaves, causing substantial profit loss. In the present research, in laboratory conditions and in the field, we evaluated the resistance to the fungus, in leaves and fruits, for 22 varieties and hybrids of tangerines. To this end, we evaluated genotypes belonging to the Germplasm Bank of the Estação Experimental de Citricultura de Bebedouro. The resistant genetic materials (found in leaves and fruits) represented four varieties of clementines (Citrus clementina); six varieties of mandarins (two belonging to C. reticulata, two to C. tangerina, one to C. deliciosa and one to C. nobilis); one tangelo (C. tangerina × C. paradisi); two mandarin hybrids (one resulting from crossing C. nobilis × C. deliciosa and the other from crossing C. clementina × C. reticulata); one tangor hybrid (C. clementina) and two satsuma hybrids (C. unshiu × C. deliciosa). We also determined a relation between the inoculation of leaves and fruits. The resistance and susceptibility following inoculation in leaves and fruits supports a relationship between these organs and the physiological responses observed for the evaluated genotypes.     

番茄早疫病菌拮抗细菌的筛选及其抑制作用

为了筛选对番茄早疫病菌具有生防作用的菌株,利用前期研究获得的17株促生菌,采用平板对峙法测定其对病原真菌的拮抗作用及对菌丝生长的抑制作用。结果发现,可有效拮抗番茄早疫病菌的生防菌有2株,其中,菌株FX2的抑菌活性较好,抑制率达到70.52%,菌株LHS11的抑制率为65.34%。菌株FX2和LHS11可通过次生代谢物抑制病原真菌,其中菌株LHS11的发酵液对番茄早疫病菌的抑制率达到65.40%,菌株FX2的发酵液的抑制率为47.26%。菌株FX2和LHS11能使病原菌菌丝发生不同程度扭曲变形。     

芹菜叶斑病病原菌细极链格孢药剂筛选

【目的】研究筛选对芹菜叶斑病(病菌为:细极链格孢Alternaria tenuissima)具有良好防治作用的药剂。【方法】采用菌丝生长速率法和琼脂片法分别用14种杀菌剂对细极链格孢(A.tenuissima)菌丝和孢子萌发做室内毒力测定并进行田间药效试验。【结果】14种杀菌剂中对病原菌菌丝抑制效果最好的分别为3%甲霜恶霉灵、5%香芹酚、10%苯醚甲环唑、其EC₅₀分别为10.8、19.9、26.2 μg/mL;对孢子萌发抑制效果最好的分别为3%甲霜恶霉灵、25%嘧菌酯、43%戊唑醇,其EC₅₀分别为15.7、29.5、38.7 μg/mL。只有3%甲霜恶霉灵具有最佳的防治效果。防效最好的药剂为3%甲霜恶霉灵和5%香芹酚,其防效分别为96.3%和83.9%。【结论】3%甲霜恶霉灵最适用于田间芹菜叶斑病的防治。     

苦荞VQ基因家族的全基因组鉴定及其在叶斑病原与激素处理下的表达谱分析

【目的】VQ基因家族在植物生长、发育以及对生物或非生物胁迫反应中发挥重要功能。在全基因组尺度上,全面鉴定苦荞（Fagopyrum tataricum L. Gaertn.）VQ（FtVQ）基因家族,分析其在苦荞叶斑病原——互格链格孢（Alternaria alternata）和黑孢霉（Nigrospora osmanthi）侵染和防御相关激素——水杨酸（SA）、茉莉酸（JA）、乙烯（ET）处理下的表达模式,为深入解析苦荞VQ基因家族在植物抗病防御中的功能及机理奠定基础,同时为优良基因资源发掘及抗病品种改良提供线索。【方法】基于VQ保守结构域的隐马尔可夫文件（PF05678）,采用HMMER 3.0对苦荞平苦一号基因组数据库进行比对搜索,鉴定VQ基因;通过DNAMAN、MapInspect、MEGA、MEME、OrthoFinder、PLACE等生物信息学工具分析基因结构、染色体分布、启动子顺式元件、蛋白质理化性质、蛋白质保守基序、蛋白质亚细胞定位和蛋白质系统进化关系;采用实时荧光定量PCR（qPCR）方法分析苦荞叶VQ基因在病原侵染或激素处理下的表达模式。【结果】从苦荞基因组中鉴定获得28个VQ基因,大小为566—1 454 bp,均无内含子,不均一地分布在8条染色体上。根据它们在染色体上的物理位置,命名为FtVQ1—FtVQ28。每一个FtVQ蛋白含有1个VQ基序——FxxxVQx（L/F/I/V/A/Y）TG（x代表任意氨基酸）。亚细胞定位预测表明,21个FtVQ蛋白定位在细胞核中,其余定位在叶绿体或细胞质中。根据蛋白质氨基酸序列与保守结构基序,FtVQ蛋白归类于5个亚家族,亚家族内基因结构和蛋白质基序相对保守。基因重复分析表明,苦荞基因组中有8对VQ旁系同源基因,均为大片段重复基因,提示大片段基因重复在FtVQ基因家族数量扩张中发挥主要作用;它们的非同义突变和同义突变的比值（Ka/Ks）均小于1,提示重复基因在进化中经历了纯化选择。启动子顺式元件预测表明,所有FtVQ基因启动子含有BIHD1OS、CGTCA、ERELEA4、W-box和类W-box等病原或SA、JA、ET反应元件,尤其在FtVQ10、FtVQ14、FtVQ15、FtVQ22、FtVQ23、FtVQ27的启动子区域密集程度更高。qPCR分析显示,在可检测的20个FtVQ基因中,有55%—70%的基因为病原或激素处理下的差异表达基因（DEGs）,其中72.7%—85.7%的DEGs的表达显著上调。【结论】苦荞基因组拥有28个VQ基因成员,部分VQ基因可能参与了苦荞对叶斑病原的抗性反应。     

促进堆肥二次发酵真菌在堆肥中的应用效果

【目的】二次发酵是实现鸡粪等养殖废弃物功能价值提高的关键阶段,本研究旨在将前期筛选得到的真菌应用于鸡粪堆肥的二次发酵阶段,探讨其促进二次发酵的效果并对其进行鉴定,为今后鸡粪的高值化与资源化利用提供理论依据和支撑。【方法】以鸡粪一次发酵产物为原料,添加实验室前期筛选的2株真菌（分别为FCM1和FCM3）进行二次发酵试验。共设置3个处理,分别为对照CK：原料中加入1%（体积L∶干物质量kg）无菌液体培养基;F1：原料中加入1% FCM1菌液;F3：原料中加入1% FCM3菌液。在二次发酵的不同时期,分析测定堆体温度、pH、电导率（EC）、铵态氮、硝态氮、种子发芽指数以及腐殖酸等指标。【结果】与对照相比,添加真菌主要促进了二次发酵阶段快速升温和腐殖化过程快速进行。与未接菌处理相比,真菌FCM3使堆料提前8 d进入升温期,真菌FCM1效果不佳,且在一定程度上延后了鸡粪堆肥的二次发酵。F3处理高温阶段（>50℃）持续了13 d,堆料的GI比对照处理提前25 d达到80%,且腐殖化程度较高（PHA=74.58%,PHA：胡敏酸/总腐殖酸）。相关分析表明,GI与pH、PHA显著正相关,与EC显著负相关。经形态和ITS rDNA测序等方法鉴定,FCM3为链格孢菌。【结论】真菌FCM3能够在一定程度上促进鸡粪堆肥二次发酵的进行,提高堆料的腐殖化程度。     

一种快速、特异性检测小麦中链格孢菌（Alternaria alternata）的巢式 PCR 方法

为建立检测小麦中链格孢菌（Alternaria alternata ）的方法,从河南省小麦黑胚籽粒上分离得到7个优势 A．alternata 病原菌株,对其 rDNA 的内部转录间隔区序列（ITS）进行测序,序列比较表明,分离到的病原菌株与 GenBank 公布的 A．alternata 的 ITS 区序列一致性达到99％～100％。根据 Alternaria 属菌株（A．alternata、A．tenuis、A．tenuissima）和麦类根腐离蠕孢菌（Bipolaris sorokiniana ）的 ITS 序列比对结果,设计出1对 A．alternata 特异性引物 Aa1F/Aa1R。利用多种河南省小麦的主要病原真菌对该引物的特异性进行验证,只有在 A．alternata 中能特异性地扩增出1条443 bp 的 DNA 片段。以真菌通用引物 ITS1/ITS4为外侧引物、特异性引物Aa1F/Aa1R 为内侧引物进行巢式 PCR 扩增,能检测到 A．alternata DNA 的最低质量浓度为50 pg/μL。因此,建立的巢式 PCR 方法能够快速、特异地检测小麦中的 A．alternata。     

高梁链格孢叶斑病病原菌鉴定

[目的]为高梁链格叶斑病的防治提供依据。[方法]对高粱叶片上的一种叶斑病进行了病原菌的分离与鉴定。[结果]病原菌在PDA平板上生产迅速．菌丝边缘白色．中央灰绿色;分生孢子串联成链状,褐色,近圆柱状或倒棍棒状,有横隔膜2～7个．纵隔膜0～4个．鉴定其为链格孢属（Alternaria）真菌。[结论]该病在高粱叶片上发病严重,应对其侵染治病过程以及致病机制进行进一步研究。